La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.
Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. En aquellos casos donde no da positiva la prueba de Biuret, da positiva la de ninhidrina, e indica que no hay proteínas pero sí hay aminoácidos libres.de un ph 4 y 8.
El átomo de carbono de un carbonilo tiene una carga positiva parcial, por lo que el C central de un 1,2,3-tricarbonilo es menos estable y más electrofílico que una cetona simple. En la mayoría de los compuestos, un carbonilo es más estable que la forma dihidroxi (hidrato). Sin embargo, la ninhidrina es un hidrato de carbono estable del C central porque esta forma no tiene el efecto desestabilizador de los centros adyacentes de carbonilo parciales positivos. El indano-1 ,2,3 -triona reacciona rápidamente con nucleófilos.
Tenga en cuenta que con el fin de generar la ninhidrina cromóforo, la amina se condensa con una molécula de ninhidrina para dar una base de Schiff. Así pues, solo amonia y aminas primarias proceden más allá de este paso. En este paso, debe haber también un protón alfa (* H en el diagrama) para la transferencia de base de Schiff, por lo que una amina adyacente a un carbono terciario no puede ser detectada por la prueba de ninhidrina. La reacción de ninhidrina con aminas secundarias da una sal de iminio, que es también de color, y esto es generalmente de color amarillo-anaranjado en color.
Es una de las reacciones más sensibles para identificar aminoácidos en general, ya que detecta una parte de aminoácido en 1 500 000 partes de agua. Aminoácidos y muchas aminas primarias dan un color violeta característico. La prolina da coloración amarilla. Por su sensibilidad esta reacción se emplea para valoración cuantitativa de amonoacidos por colorimetria. La valoración de aminoácidos en orina, por ejemplo, tiene importancia en medicina ya que en algunas enfermedades como hepatopatías, infecciones agudas o diabetes mellitus en las que se presente hiperaminoacidemia, estas se ven acompañadas por aminoaciduria paralela. Algunas enfermedades metabólicas congénitas dan lugar a la eliminación anormal de algunos aminoácidos en la orina (p ej fenilcetonuria).
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