El Campeonato Nacional de Fútbol de Segunda División de 1964 fue el 13° torneo disputado de la segunda categoría del fútbol profesional chileno. Contó con la participación de trece equipos, ya que ningún equipo fue aceptado luego del descenso de Valparaíso Ferroviarios la temporada anterior. Además Iberia, cambió su nombre a Iberia-Puente Alto, luego de su fusión con Fatucén de Puente Alto.
El torneo se jugó en tres rondas con un sistema de todos contra todos y el campeón del torneo fue O'Higgins, que consiguió el ascenso para la Primera División.
En la parte baja de la tabla de posiciones se ubicó Ovalle Ferroviarios, que mantuvo su cupo en Segunda, ya que se decidió cambiar su nombre a Deportes Ovalle para 1965.
PJ=Partidos jugados; PG=Partidos ganados; PE=Partidos empatados; PP=Partidos perdidos; GF=Goles a favor; GC=Goles en contra; Dif=Diferencia de gol; Pts=Puntos
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