Sudan IV

Sudan IV (C₂₄H₂₀N₄O) es un colorante diazo lisocromo (soluble en grasa) que se utiliza para la tinción de lípidos, triglicéridos y lipoproteínas en secciones de parafina congeladas. Tiene el aspecto de cristales marrón rojizo con un punto de fusión de 199 °C y una absorción máxima a 520(357) nm. ^[2]​

Las técnicas de coloración para la identificación de lípidos sirven para determinar principalmente lípidos homofásicos. El Sudán IV, llamado Escarlata R, se basa en que el colorante es más soluble en lípidos que en el propio disolvente en el que va contenido. Se consideran lípidos todas aquellas sustancias orgánicas insolubles en agua total o parcialmente, pero solubles en acetona, alcohol, cloroformo, éter, etc... y que en general son untuosas al tacto.

Los colorantes para grasas son más solubles en las propias grasas que en el medio en el que van disueltos. Así, al bañar la grasa con la solución del colorante éste tiende a disolverse en la grasa que se va cargando del colorante. Por regla general estos colorantes siempre van en solución alcohólica o bien en una mezcla de alcohol/acetona o alcohol/agua.

El Sudán IV es una coloración progresiva, es decir, que cuanto mayor tiempo de exposición al colorante mayor es la intensidad de tinción.

La inestabilidad de las soluciones colorantes es el principal problema de esta técnica, pues la evaporación de parte del disolvente provoca la precipitación del colorante sobre el tejido e induce a error de interpretación (falsos positivos). Para evitar estos falsos positivos deben seguirse los siguientes consejos:

Tejido adiposo y lípidos en general.

Para la fijación previa del tejido el mejor fijador es el formol, que, si bien fija totalmente las grasas neutras, actúa de manera variable sobre le resto de las estructuras lipídicas (colesterol y derivados, fosfolípidos, esfingolípidos...). El formol es aún mejor fijador de grasas si se emplea como formol-cálcico (formol al 10% y cloruro cálcico al 1%). De esta manera los iones de calcio estabilizan los lípidos y el formol los fija más eficazmente.

Otros fijadores que poseen la capacidad de insolubilizar las grasas neutras son el Fleming, Helly y Zenker.

Como se ha indicado, las grasas son insolubles en agua, pero solubles en ciertos disolventes orgánicos como acetona o el cloroformo. Por ello, en la técnica histológica habitual las grasas se disuelven en los líquidos intermediarios propios de la inclusión de parafina, quedando exclusivamente en el tejido los huecos donde éstas se encontraban. Para evitar este problema, es necesario incluir los tejidos en gelatina o polietilenglicol, a menos que se prefiera realizar cortes en congelación.

Los cortes han de ser normalmente por congelación, a 10 micras, aunque también se puede utilizar la parafina.

La técnica de tinción es como sigue: